产品货号:
JN5092
中文名称:
核糖核酸酶R
英文名称:
Ribonuclease R
产品规格:
500U|2500U|5000U
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1~3天
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核糖核酸酶R (Ribonuclease R,RNase R)来源于大肠杆菌RNR超家族,是一种镁离子依赖性的3'—5'核糖核酸外切酶,可从3'—5'方向将RNA逐步切割成二核苷酸和三核苷酸。RNase R几乎能够消化所有线性的RNA,但不易消化环状RNA、套索结构RNA和3'端突出少于7个核苷酸的短双链RNA分子。RNase R常用于基因表达和可变剪切研究,可消化线性RNA以富集环状RNA或套索结构RNA。
- 基因表达研究;
- 可变剪切研究;
- 从生物样本中富集circRNA;
- 识别内含子套索结构RNA;
- 鉴定外显子circRNA。
在37℃标准反应条件下,10分钟将1μg poly(A)转变成酸溶核苷酸所需的酶定义为1U
组分 | 500U | 2500U | 5000U |
RNase R(20U/μL) | 25μL | 125μL | 250μL |
10×RNase R Buffer | 1mL | 5mL | 5mL×2 |
RNase-Free Water | 1mL | 5mL | 5mL×2 |
保存:-20℃,避免反复冻融。
- 实验前应清洁工作台,准备所需的无RNase物料,降低或排除实验室使用中的溶液、EP管、吸头等RNase残留影响;
- RNase R的活性需要0.1~1.0mM Mg2+;
- 随底物RNA的增加,可适当延长消化时间和增加酶量;
- 有些circRNA或套索结构RNA在经长时间RNase R消化会导致丰度降低,可能是因为其耐受RNase R消化能力弱;
- EDTA会影响RNase R的活性。
circRNA、Total RNA及ssRNA消化实验。分别将0.5~2U RNase R与circRNA混合,5U RNase R与Total RNA和ssRNA混合,37℃孵育30min,70℃ 10min后进行电泳检测。
图1.circRNA消化实验: M:DNA Ladder; 泳道1:阴性对照; 泳道2:0.5U RNase R与1μg circRNA孵育; 泳道3:1U RNase R与1μg circRNA孵育; 泳道4:2U RNase R与1μg circRNA孵育。 | 图2.Total RNA消化实验: M:DNA Ladder; 泳道1:本RNase R; 泳道2:竞品RNase R; 泳道3:阴性对照。 | 图3.ssRNA消化实验: M:DNA Ladder; 泳道1:本RNase R; 泳道2:竞品RNase R; 泳道3:阴性对照。 |
- RNase R消化实验
成分 用量 RNA样本 ≤5μg RNase R(20U/μL) 2~4U/μg 10×RNase R Buffer 2μL RNase-Free Water 至20μL - 1μg RNA样本使用RNase R为2~4U。
- 失活步骤:
70℃反应5min可使酶失活(如后续进行样本纯化回收,该步骤可省略); - 纯化回收:
消化后的RNA可使用苯酚∶氯仿∶异戊醇(25:24:1,V:V)溶液抽提,再使用乙醇沉淀回收。也可以使用RNA纯化柱或磁珠进行纯化回收(如进行纯化回收,可忽略酶失活操作步骤)。
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